The role of serine-threonine-kinases in epithelial transport

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dc.contributor.advisor Lang, F. de_DE
dc.contributor.author Rexhepaj, Rexhep de_DE
dc.date.accessioned 2008-02-19 de_DE
dc.date.accessioned 2014-03-17T11:27:49Z
dc.date.available 2008-02-19 de_DE
dc.date.available 2014-03-17T11:27:49Z
dc.date.issued 2008 de_DE
dc.identifier.other 277668956 de_DE
dc.identifier.uri http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:21-opus-32634 de_DE
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10900/43881
dc.description.abstract The phosphoinositide dependent kinase PDK1 activates the SGK isoforms SGK1, SGK2 and SGK3 and protein kinase B isoforms which in turn are known to stimulate a variety of sodium coupled transporters, such as the renal and intestinal Na+-dependent glucose transporter SGLT1. SGK1 is known to be up-regulated by mineralocorticoids and to enhance ENaC activity in several expression systems. Moreover, the amiloride-sensitive transepithelial potential difference in collecting duct is lower in gene-targeted mice lacking SGK1 (sgk1-/-) than in their wild type littermates (sgk1+/+). Accordingly, the ability of sgk1-/- mice to decrease urinary sodium output during salt depletion is impaired. ENaC activity and thus transepithelial potential difference in the colon are similarly influenced by mineralocorticoids. The first aim of the present study was to explore the role of PDK1 in in electrogenic glucose and amino-acid transport in small intestine and proximal renal tubules As mice completely lacking functional PDK1 are not viable, mice expressing 10-25% of PDK1 (pdk1hm) were compared to their wild type littermates (pdk1wt). Body weight was significantly smaller in pdk1hm than in pdk1wt mice. Despite lower body weight of pdk1hm mice, food and water intake were similar in pdk1hm and pdk1wt mice. Ussing chamber experiments showed that electrogenic transport of glucose as well as phenylalanine, cysteine, glutamine, proline, leucine and tryptophan was significantly smaller in jejunum of pdk1hm mice compared to pdk1wt mice. Similarly, proximal tubular electrogenic glucose transport as well as phenylalanine, glutamine and proline transport in isolated perfused renal tubule segments was decreased. Intraperitoneal injection of 3 g/kg bw glucose resulted in a similar increase of plasma glucose concentration in pdk1hm and in pdk1wt mice but led to a higher increase of urinary glucose excretion in pdk1hm mice. The urinary excretion of proline, valine, guanidinoacetate, methionine, phenylalanine, citrulline, glutamine/glutamate and tryptophan was significantly larger in pdk1hm than in pdk1wt mice. According to immunoblotting of brush border membrane proteins prepared from kidney, expression of the Na+-dependent neutral amino acid transporter B0AT1 (SLC6A19), the glutamate transporter EAAC1/EAAT3 (SLC1A1) and the transporter for cationic amino acids and cystine b0,+AT (SLC7A9) was decreased but the Na+/proline cotransporter SIT (SLC6A20) was increased in pdk1hm mice. In conclusion, reduction of functional PDK1 leads to impairment of intestinal absorption and renal reabsorption of amino acids of electrogenic intestinal glucose absorption and renal glucose reabsorption. The combined intestinal and renal loss of amino acids may contribute to the growth defect of PDK1 deficient mice. The experiments disclose a novel element of glucose transport regulation in kidney and small intestine. The next step was to look at the transepithelial potential (Vte) and the apparent amiloride-sensitive equivalent short circuit current (Iamil) in colon from sgk1-/- and sgk1+/+ mice. Both Vte and Iamil were significantly (p<0.05) higher in untreated sgk1-/- than in untreated sgk1+/+ mice under control diet. A 7 day exposure to low salt diet increased Vte and Iamil in both genotypes but did not abrogate the differences of Vte and Iamil between sgk1-/- and sgk1+/+ mice. Plasma aldosterone levels were significantly higher in sgk1-/- than in sgk1+/+ mice both under control conditions and under low salt diet. Treatment with dexamethasone (10µg/g BW) or with DOCA (1.5mg per day) significantly increased Vte and Iamil in sgk1+/+ mice but not in sgk1-/- mice. Under treatment with dexamethasone or DOCA Vte and Iamil were similar in sgk1-/- and sgk1+/+ mice. In conclusion, lack of SGK1 does not disrupt colonic ENaC activity and its regulation by salt depletion. Finally the functional significance of SGK3-dependent regulation of intestinal transport were studied. .Xenopus oocyte coexpression experiments revealed the capacity of SGK3 to up-regulate a variety of transport systems including the sodium-dependent glucose transporter SGLT1. To this end experiments were performed in gene targeted mice lacking functional sgk3 (sgk3-/-) and their wild type littermates (sgk3+/+). Oral food intake and fecal dry weight were significantly larger in sgk3-/- than in sgk3+/+mice. Glucose-induced current (Ig) in Ussing chamber as a measure of Na+ coupled glucose transport was significantly smaller in sgk3-/- than in sgk3+/+mouse jejunal segments. Fasting plasma glucose concentrations were significantly lower in sgk3-/- than in sgk3+/+mice. Intestinal electrogenic transport of phenylalanine, cysteine, glutamine and proline were not significantly different between sgk3-/- and sgk3+/+ mice. In conclusion, SGK3 is required for adequate intestinal Na+ coupled glucose transport and impaired glucose absorption may contribute to delayed growth and decreased plasma glucose concentrations of SGK3 deficient mice. The hypoglycemia might lead to enhanced food intake to compensate for impaired intestinal absorption. en
dc.description.abstract Die phosphoinositid-abhängige Kinase 1 (PDK1) aktiviert die SGK-Isoformen SGK1, SGK2 und SGK3 sowie die Isoformen der Proteinkinase B, die eine Vielzahl von Natrium-gekoppelten Transportern stimulieren wie z.B. den renalen und intestinalen glucose-Transporter SGLT1. SGK1 wird durch Mineralokortikoide hochreguliert und stimuliert die Aktivität des epithelialen Natrium-Kanals ENaC in verschiedenen Expressionssystemen. In SGK1 defizienten Mäusen (sgk1-/-) ist die amilorid-hemmbare transepitheliale Potentialdifferenz niedriger als in Wildtyp-Mäusen, unter Niedrigsalz-Diät ist die Fähigkeit zur Na-Konservierung in den sgk1-/- Mäusen eingeschränkt. Die ENaC-Aktivität im Kolon ist ähnlich wie in der Niere mineralokortikoid-abhängig. Das Ziel der ersten Studie war es, den Einfluss der PDK1 am elektrogenen Glukose- und Aminosäurentransport im Dünndarm und im proximalen Tubulus zu untersuchen. Da Mäuse mit vollständigem PDK1-Verlust nicht lebensfähig sind, wurden PDK1-hypomorphe Mäuse (pdk1hm) mit einer PDK1-Restaktivität von 10-25% untersucht. Das Körpergewicht der PDK1-hypomorphen Mäuse war signifikant geringer als dasjenige der Wildtyp-Tiere, die Futter- und Flüssigkeitsaufnahme waren jedoch ähnlich hoch. Ussing-Kammer-Experimente zeigten einen reduzierten elektrogenen Transport für Glukose sowie für die Aminosäuren Phenylalanin, Cystein, Glutamin, Prolin, Leucin und Tryptophan in pdk1hm -Mäusen verglichen mit pdk1wt Mäusen. Analog dazu war der elektrogene Transport im isolierten proximalen Tubulus für Glucose sowie für Phenylalanin, Glutamin und Prolin vermindert. Unter intraperitonealer Beladung mit 3 g/kg Glucose kam es zu einer Glukosurie in pdk1hm -Mäusen, trotz ähnlich hoher Glukose-Spiegel wie in Wildtyp-Mäusen. Die Urinausscheidung von Prolin, Valin, Guanidinoacetat, Methionin, Phenylalanin, Citrullin, Glutamine/Glutamat und Tryptophan war in pdk1hm -Mäusen signifikant höher als in Widltyp-Mäusen. Im Western Blot von renalen Bürstensaum-Membranen von pdk1hm Mäusen war die Expression der Na+-abhängigen neutralen Aminosäuren-transporter B0AT1 (SLC6A19), des Glutamat-Transporters EAAC1/EAAT3 (SLC1A1) sowie des Transporter für kationische Aminosäuren und Cystin b0,+AT (SLC7A9) erniedrigt, die Expression des Na+-Prolin Cotransporters SIT (SLC6A20) erhöht. Zusammenfassend konnte gezeigt werden, dass eine Reduktion der PDK1 zu einer verminderten intestinalen Absorption sowie renalen Reabsorption von Glukose und Aminosäuren führte, was auf einen bisher nicht bekannten Regulationsweg hinweist. Der kombinierte intestinale und renale Verlust von Aminosäuren und Glukose könnte zum Minderwuchs der PDK1 hypomorphen Mäuse beitragen. In weiteren Untersuchungen wurde die transepitheliale Potentialdifferenz (Vte) und der amilorid-hemmbare Kurzschluss-Strom (Iamil) im Kolon von SGK1 defizienten (sgk1-/-) und Wildtyp-Mäusen untersucht. Sowohl Vte und Iamil waren in unbehandelten sgk1-/--Mäusen unter Kontrolldiät signifikant höher als in sgk1+/+ Mäusen. Eine 7-tägige Behandlung mit einer Niedrigsalz-Diät erhöhte Vte und Iamil in beiden Genotypen, konnte den Unterschied in Vte und Iamil zwischen sgk1-/-- und Wildtyp-Mäusen jedoch nicht aufheben. Plasma-Aldosteron-Spiegel waren in sgk1-/- -Mäusen sowohl unter Kontroll- wie Niedrigsalz-Diät signifikant höher. Behandlung mit Dexamethason (10µg/g) oder mit DOCA (1.5mg/ die) erhöhte Vte und Iamil nur in Wildtyp-Mäusen, jedoch nicht in sgk1-/- Mäusen. Unter Behandlung mit Dexamethason oder DOCA waren sowohl Vte als auch Iamil in sgk1-/- und Wildtyp-Mäusen ähnlich hoch. Die Ergebnisse zeigen zusammengenommen, dass ein Fehlen der SGK1 nicht die Aktivität und Regulation des ENaCs im Kolon unterbricht. Zuletzt wurde die funktionelle Bedeutung der SGK3 in der Regulation des intestinalen Transports untersucht. Zuvor hatten Experimente im Xenopus-Expressionssystem gezeigt, dass die SGK3 eine Vielzahl von Transportern beeinflussen kann, u.a. den Glucosetransporters SGLT1. In SGK3-defizienten Mäusen (sgk3-/-) zeigte sich verglichen mit Wildtyp-Mäusen eine höhere Futteraufnahme und ein höheres Stuhltrockengewicht. Die Glukose-induzierten Ströme (Iglc) waren im Jejunum signifikant geringer in sgk3-/- - Mäusen als in Wildtyp-Tieren. Der Nüchtern-Blutzucker war in sgk3-/- -Mäusen signifikant niedriger. Der intestinale elektrogene Transport von Phenylalanin, Cystein, Glutamin und Prolin ware hingegen zwischen sgk3-/- und Wildtyp-Mäusen nicht verschieden. Daher kann gefolgert warden, dass die SGK3 für die intestinale Na+-gekoppelte Glukoseaufnahme erforderlich ist und dass eine verminderte Glukoseaufnahme für die Wachstumsretardierung und die niedrigen Blutzuckerwerte verantwortlich sein könnte, was zu einer kompensatorischen Zunahme der Futteraufnahme führen könnte. de_DE
dc.language.iso en de_DE
dc.publisher Universität Tübingen de_DE
dc.rights ubt-podno de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_ohne_pod.php?la=de de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_ohne_pod.php?la=en en
dc.subject.classification Biochemie de_DE
dc.subject.ddc 570 de_DE
dc.subject.other Seri-Threonin-Kinasen , epithelial transport de_DE
dc.subject.other Seri-Threonin-Kinasen , Transepithelialer Transport en
dc.title The role of serine-threonine-kinases in epithelial transport en
dc.title Die Rolle von Serin-Threonin-Kinasen für epitheliale Transportvorgänge de_DE
dc.type PhDThesis de_DE
dcterms.dateAccepted 2008-02-12 de_DE
utue.publikation.fachbereich Interfakultäres Institut für Biochemie (IFIB) de_DE
utue.publikation.fakultaet 8 Zentrale, interfakultäre und fakultätsübergreifende Einrichtungen de_DE
dcterms.DCMIType Text de_DE
utue.publikation.typ doctoralThesis de_DE
utue.opus.id 3263 de_DE
thesis.grantor 14 Fakultät für Chemie und Pharmazie de_DE

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